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1.产品介绍 Flag标签是一个由八个亲水氨基酸组成的多肽片段，定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶分解。DYKDDDDK-Nanoab-agaroseBeads是以抗Flag(DYKDDDDK)纳米抗体为亲和配体，一步纯化原核、酵母或哺乳动物细胞表达的Flag标签融合蛋白。
DYKDDDDK-Nanoab-agaroseBeads以4%琼脂糖凝胶为基质，杂蛋白非特异性结合少，可用于Flag标签融合蛋白的纯化和免疫沉淀（IP)。
2.试剂准备
2.1样品准备
上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡液对样品或细胞培养液稀释，或者用平衡液透析。样品在上样前建议离心或用0.22um或0.45um滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
2.2缓冲液的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22um或0.45um滤膜过滤。
平衡/洗杂液：50mMTris，0.15MNaCl，pH7.4
酸性洗脱液：0.1MglycineHCl，pH3.0
竞争性洗脱液：50mMTris，0.15MNaCl，100-500ugflag多肽/ml，pH7.4
中和液：1MTris-HCl，pH8.0
3.样品纯化
3.1柱层析
1)将DYKDDDDK-Nanoab-agaroseBeads装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下。
2)将样品加到平衡好的DYKDDDDK-Nanoab-agaroseBeads中，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。
3)用10倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4)A酸性洗脱∶使用5倍柱体积的酸性洗脱液洗脱，收集管中预先加好中和液，加入量15-25ul中和液/ml洗脱液，分管收集。
注：酸性洗脱后填料要立即用平衡液平衡，DYKDDDDK-Nanoab-agaroseBeads在洗脱液中不要超过20min。
B竞争性洗脱：使用5倍柱体积的竞争性洗脱液洗脱。分管收集。
5)使用3倍柱体积的洗脱液再生，然后用平衡液平衡至中性。
6)然后保存在含20%乙醇的PBS溶液中，2-8℃保存。
16、纳米抗体beads
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